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上海达为科生物科技有限公司

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SNP检测
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SNP检测公司,即单核苷酸多态,是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态。广泛用于群体遗传学研究,和**相关基因的研究,在**基因组学、诊断学和生物医学研究中起重要作用。上海达为科生物科技有限公司可利用测序为您提供SNP的分析,该方法原理简单,容易掌握,适合对短基因片断的SNP筛查,通过直接测序方法进行SNP检测的检出率接近100。

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SNP检测
SNP
本公司推出多种SNP分型服务的方法:直接测序方法、连接酶检测反应(LDR)方法、多重SNaPshot SNP方法、MassArray方法以及Taqman探针方法,为广大客户提供多样的选择!
1.连接酶检测反应(LDR)分型方法
技术原理:主要应用连接酶检测反应 (ligase detection reaction,LDR)技术。即在Taq DNA连接酶的作用下,当左右两条寡核苷酸探针与目的DNA序列互补,并且两条探针之间没有空隙时才能发生连接反应,否则连接反应不能进行,后通过荧光扫描片段长度,实现对SNP 位点的检测。
原理及实验流程示意图:
2.多重SNaPshot SNP分型方法
技术原理:SNaPshot SNP分型是一种以单碱基延伸原理为基础,同时利用多重PCR对多个已知SNP 位点进行遗传分型的方法。在一个含有测序酶,四种荧光标记的ddNTP,紧挨多态位点5’端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI 3730 测序仪跑胶后,根据峰的颜色可知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型,根据峰移动的胶位置确定该延伸产物对应的SNP位点。
原理及实验流程示意图:
3.MassArray SNP分型方法
技术原理: Sequenom MassArray系统主要是利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI-TOF MS) 进行分析,即PCR扩增产物或者预处理样本在延伸单碱基后,将制备的样品分析物与芯片基质共结晶,将该晶体放入质谱仪的真空管,而后用瞬时纳秒 (10-9s) 强激光激发,由于基质分子经辐射吸收能量,导致能量蓄积并迅速产热,从而使基质晶体升华,核酸分子就会解吸附并转变为亚稳态离子,产生的离子多为单电荷离子,这些单电荷离子在加速电场中获得相同的动能,进而在一非电场漂移区内按照其质荷比率得以分离,在真空小管中飞行到达检测器。
原理及实验流程示意图:
4.直接测序法
技术原理:将待检测片段进行PCR扩增并直接测序是SNP检测方法中准确的方法。纯合位点为单峰,而杂合峰为套峰,因而很容易将几种基因型区分开来。直接测序法不仅可用于对已知位点的检测,还可用于发现未知的SNP位点。
原理及实验流程示意图:
5.Taqman 探针方法
技术原理:在PCR 反应系统中加入2 种不同荧光标记的探针,它们可分别与2个等位基因配对。正常情况下,由于探针5′端荧光基团和3′端淬灭基团紧邻在一起,荧光被淬灭。随着PCR 的有效进行,与模板配对的探针逐步被Taq DNA 聚合酶5′→3′外切酶活性切割,致使探针5′端上的荧光基团与3′端的淬灭基团分离,淬灭效应解除,报告荧光基团被激活;而与模板不能配对的探针(代表另一种等位基因)不能被有效切割,故检测不到荧光信号,通过相应仪器检测荧光值的变化即可实现SNP位点检测。
原理及实验流程示意图:

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